隨著城市化的發(fā)展,來(lái)自交通、工業(yè)、資源開(kāi)采、建筑和娛樂(lè)活動(dòng)的噪音污染在時(shí)間和空間上不斷擴(kuò)大,陸地和水中的人為噪聲增加,對(duì)人類和野生動(dòng)物的健康造成了越來(lái)越多的不良影響。有研究表明,長(zhǎng)期暴露于人為噪聲會(huì)對(duì)魚(yú)類物種造成包括生存能力下降、生長(zhǎng)受損、生理壓力等方面的的負(fù)面影響。基于目前快速變化的水下聲音景觀,研究不同的噪聲狀況如何影響魚(yú)類的發(fā)育、生理和行為至關(guān)重要。本文測(cè)試了暴露于不斷增加的和不同時(shí)間模式下的噪音對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)發(fā)育、生理壓力和行為模式的影響,以探究噪音如何影響動(dòng)物的個(gè)體發(fā)育情況。
實(shí)驗(yàn)方法
本研究通過(guò)測(cè)量暴露于不同噪聲水平和時(shí)間模式變化的實(shí)驗(yàn)組之間,斑馬魚(yú)孵化率、總長(zhǎng)度、死亡率、心率、皮質(zhì)醇水平等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),來(lái)研究噪聲對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的發(fā)育、生理壓力和行為模式的影響。
實(shí)驗(yàn)對(duì)象
在斑馬魚(yú)受精后2小時(shí),從2至6個(gè)繁殖箱(每個(gè)箱包含約10只雌性和5只雄性)收集魚(yú)卵。將收集的卵混合在含有胚胎培養(yǎng)基的單個(gè)培養(yǎng)皿中,并分配到不同組,每組50個(gè)樣本,共分為3-5組,每組被分配到不同的聲學(xué)實(shí)驗(yàn)箱。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
為了測(cè)試振幅對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的影響,研究使用兩個(gè)不同振幅或聲壓級(jí)(SPL)的連續(xù)白噪聲(CN)聲音文件,即130 dB(CN130)和150 dB(CN150),這些噪聲水平與淡水水生環(huán)境中的人為噪聲相似,用來(lái)模擬人為水中噪音。
為了評(píng)估不同噪聲時(shí)間機(jī)制的影響,生成了三個(gè)額外的間歇噪聲和60分鐘持續(xù)噪聲(圖1)。三個(gè)額外的間歇噪聲為:IN1-持續(xù)時(shí)間為5-12 s的短噪聲段,間隔為1-120 s的無(wú)聲間隔(每小時(shí)60次噪聲事件),達(dá)到約15%的總噪聲暴露;IN2-30-60秒的中等噪聲段,間隔1-10分鐘的靜默,每小時(shí)15個(gè)噪聲段,總體噪聲暴露與IN1相似;和IN3-15分鐘的長(zhǎng)噪聲段,間隔15分鐘的靜默期(約占總噪聲的50%)。測(cè)試所用聲音通過(guò)軟件將聲音調(diào)整為相對(duì)平坦的頻譜,放置于聲學(xué)實(shí)驗(yàn)箱中的水下?lián)P聲器進(jìn)行播放。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采集
上午10點(diǎn)至11點(diǎn),檢查受精后48小時(shí)胚胎存活率。兩個(gè)發(fā)育階段,即受精后3天和受精后5 天,在每天早晨固定時(shí)間收集斑馬魚(yú)形態(tài)學(xué)和生理學(xué)數(shù)據(jù)。
圖1
斑馬魚(yú)測(cè)量指標(biāo)
(1)形態(tài)學(xué)和心率測(cè)量。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中,評(píng)估聲學(xué)處理對(duì)斑馬魚(yú)幼體形態(tài)發(fā)育和心率的影響。本研究使用Noldus 斑馬魚(yú)微視行為分析系統(tǒng)對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析及自動(dòng)檢測(cè)心臟活動(dòng)。
斑馬魚(yú)微視行為分析系統(tǒng)(DanioScope)是用于評(píng)估和分析斑馬魚(yú)胚胎及幼魚(yú)活動(dòng)的專業(yè)軟件。該系統(tǒng)可以通過(guò)視頻文件和靜態(tài)圖像測(cè)量斑馬魚(yú)胚胎及幼魚(yú)胎動(dòng)、心跳、血液(和腸道)流動(dòng)、形態(tài)學(xué)特征等多種實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。并且,系統(tǒng)支持高通量的斑馬魚(yú)測(cè)試,可以節(jié)省實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、獲取數(shù)據(jù)和分析結(jié)果的大量時(shí)間,提升研究效率。
(2)卵黃囊&皮質(zhì)醇測(cè)量。分析基于兩個(gè)不同發(fā)育階段的斑馬魚(yú)幼魚(yú),以測(cè)試噪聲水平增加和不同噪聲時(shí)間模式對(duì)卵黃囊和皮質(zhì)醇生理指標(biāo)的影響。
(3)光/暗選擇測(cè)量。用于評(píng)估斑馬魚(yú)幼體的環(huán)境壓力,通過(guò)在光亮側(cè)花費(fèi)的時(shí)間百分比的增加反映了該模型生物體的焦慮情況。
(4)行為模式。本研究會(huì)對(duì)斑馬魚(yú)幼體進(jìn)行自發(fā)交替行為(SAB)測(cè)試,該行為指動(dòng)物在環(huán)境下連續(xù)轉(zhuǎn)彎過(guò)程中交替轉(zhuǎn)彎方向的趨勢(shì),用來(lái)探究噪音對(duì)斑馬魚(yú)行為模式的影響。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
孵化、生長(zhǎng)和死亡率
本研究中使用的噪聲對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的孵化率沒(méi)有顯著影響,也沒(méi)有引起明顯的胚胎發(fā)育異常。此外,噪聲水平和時(shí)間模式的變化不會(huì)影響測(cè)得的斑馬魚(yú)的總長(zhǎng)度。但是,在連續(xù)噪聲(CN)下,觀察到CN150噪聲暴露導(dǎo)致斑馬魚(yú)死亡率顯著增加(圖2,C)。噪聲時(shí)間的變化也導(dǎo)致所有噪聲暴露組的死亡率增加(圖2,D)。間歇性的短噪音(IN1)和中噪音(IN2)周期導(dǎo)致較高死亡率,而呈現(xiàn)長(zhǎng)噪音段(IN3)的治療與對(duì)照組相比未導(dǎo)致顯著死亡率(圖2,D)。
圖2
生理應(yīng)激指標(biāo)。心率、卵黃囊消耗和皮質(zhì)醇水平隨著噪聲水平的增加而顯著增加,這清楚地表明斑馬魚(yú)較高的生理應(yīng)激。對(duì)照組幼魚(yú)在受精后3天時(shí)的心率約為173±30 bpm,在播放CN150后增加到191±60 bpm。而在受精后5天時(shí),心率約為203±40(對(duì)照組),在CN150處理后增加到224±50 bpm。在受精后3天和5天幼魚(yú)中,隨著噪聲水平的增加,證實(shí)了心率的顯著的增加,與對(duì)照相比,CN150引起的差異最大(圖3,A)。
同樣,在受精后3天和5天幼魚(yú)中,與對(duì)照組相比,隨著噪聲水平的增加,卵黃囊消耗量顯著增加(圖3,B)。噪音干擾時(shí)間的變化對(duì)心率和卵黃囊消耗產(chǎn)生影響,表明噪聲時(shí)間機(jī)制對(duì)于調(diào)節(jié)生理應(yīng)激和胚胎內(nèi)源性能量?jī)?chǔ)備的消耗非常重要。
在受精后3天和受精后5天,心率受噪聲時(shí)間變化的顯著影響,與受精后5天的間歇性噪音相比,連續(xù)噪聲造成的影響最大(圖3,C)。此外,這些噪聲處理之間的卵黃囊消耗量存在顯著差異(圖3,D)。總體而言,心率與卵黃囊大小呈負(fù)相關(guān),這意味著心率較高的個(gè)體消耗能量?jī)?chǔ)備更快(圖3,E)。
通過(guò)皮質(zhì)醇測(cè)量證實(shí)了噪聲誘導(dǎo)的生理應(yīng)激,皮質(zhì)醇水平隨著噪聲振幅的增加而顯著升高(圖4),噪聲時(shí)間機(jī)制的變化導(dǎo)致皮質(zhì)醇的變化。
圖3
圖4
行為模式。為了評(píng)估行為水平的潛在變化,使用焦慮相關(guān)的光/暗選擇測(cè)試(圖5,A),進(jìn)一步測(cè)試了暴露于150dB連續(xù)噪聲(CN150)受精后5天的幼魚(yú)。根據(jù)測(cè)量,暴露于噪音的樣本表現(xiàn)出較強(qiáng)的避暗或暗視癥(圖5,B)。同時(shí),使用自發(fā)交替行為(SAB)實(shí)驗(yàn)(圖6,A)測(cè)試了斑馬魚(yú)幼魚(yú)的探索行為。結(jié)果顯示,在無(wú)聲控制條件下飼養(yǎng)的70%的幼魚(yú)表現(xiàn)出正常的游泳交替,而噪聲處理組(CN150)僅為34%(圖6,B)。在曠場(chǎng)中進(jìn)一步研究了這些樣本的游泳模式,發(fā)現(xiàn)噪聲處理過(guò)的幼魚(yú)的覆蓋面積減少。
圖5
圖6
討論
本文測(cè)試了不斷增加的噪聲程度和不同的噪音時(shí)間機(jī)制對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的影響。研究結(jié)果顯示:
1. 噪聲不影響一般斑馬魚(yú)胚胎的發(fā)育或孵化,但較高的噪聲水平會(huì)導(dǎo)致死亡率增加;
2. 在受精后3天和5天,斑馬魚(yú)心率、卵黃囊消耗量和皮質(zhì)醇水平隨著噪聲水平的增加而顯著增加;
3. 噪聲時(shí)間模式的變化表明,噪音持續(xù)的機(jī)制比噪聲暴露的總時(shí)間更重要;
4. 暴露于連續(xù)性高噪聲的斑馬魚(yú)幼魚(yú)在焦慮相關(guān)的明/暗選擇測(cè)試中表現(xiàn)出更高的暗回避能力,并且自發(fā)交替行為受損;
本文通過(guò)研究噪音對(duì)水生生態(tài)系統(tǒng)中斑馬魚(yú)幼魚(yú)的發(fā)育、生理壓力和行為模式等的影響,強(qiáng)調(diào)了對(duì)噪音管理的重要性。
參考文獻(xiàn)
Lara R A, Vasconcelos R O. Impact of noise on development, physiological stress and behavioural patterns in larval zebrafish. Scientific Reports, 2021, 11(1): 1-14.
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